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本制品采用分子进化技术高达60℃的全新高温反转录酶，可以通读GC含量丰富，二级结构复杂的RNA模板，极大提高反转录效率。5×HotScript RT MasterMix为一管式反转录预混Mix，含有反转录所需的所有试剂（HotScript M-MuLV RTase、RNase Inhibitor、Random primers、Oligo dT Primer、dNTP Mixture、Buffer），只需加入模板RNA和水即可进行反应。使得cDNA的合成更加的方便快捷，特别适合cDNA合成以后的两步法Real-Time PCR检测。

• 第一链cDNA合成。
  
• 可用于高拷贝、低拷贝基因的检测，尤其GC含量高，复杂模板的高温反转录。

• 新一代高温反转录酶HotScript M-MuLV RTase极大提高包括复杂RNA模板的反转录效率，CT值一般提早2～3个循环。
  
• 全预混的反转录Mix，只需加入RNA和水，15分钟简单快速完成反转录。
  
• 预混合反转录Mix在-20℃不冻结，减少了化冻和混匀时间，使用更简单。
  
• RNA模板的体积最多可加到总体积的80%，非常适合于低浓度RNA模板的逆转录反应。
  
• 本制品针对qPCR进行特别优化oligo dT和N6随机引物配比，使cDNA合成可从RNA转录本的各个区域起始并具有相同的反转录效率，最大程度保证了qPCR结果的真实性和可重复性。

• 避免RNase污染。
  
• 为保证反转录成功建议使用高质量的RNA样品。
  
• 5×HotScript RT MasterMix非常粘稠，溶液容易吸附在管壁和吸头外导致损失，用前请点甩离心后使用，并且避免吸头外壁沾附损失。5×HotScript RT MasterMix内包含的酶均为过量，即使每次按照3.6μL～3.8μL使用，也不影响使用效果。

• 将模板RNA在冰上解冻；RNase-free H2O在室温（15～25℃）解冻，解冻后迅速置于冰上。使用前将每种溶液轻弹或者轻微涡旋振荡混匀，简短离心以收集残留在管壁的液体到管底。
  
• 在RNase-free管里面加入以下成分：(建议使用PCR管冰上配制，置PCR仪反应)
  

  成分	用量
  Total RNA/mRNA	≤16μL*
  5×HotScript RT MasterMix	4μL (见注意事项3)
  RNase free H2O	至20μL

  注^*：Total RNA不超过2μg，mRNA不超过200ng (20μL体系)
  
• 移液器轻轻吹打混匀（总体积20μL），25℃孵育10min，50℃孵育15min。
  注意：本制品在42℃～60℃反转录均有稳定良好效果。如果模板具有复杂二级结构或高GC区域，可尝试将反应温度提高至55℃～60℃，有助于提高产量。
  
• 85℃加热5sec失活HotScript M-MuLV RTase。
  
• 得到的cDNA产物可立即用于qPCR反应，或在-20℃保存，并在半年内使用；长期存放建议分装后在-70℃保存。cDNA应避免反复冻融。